5-溴-2’-脱氧尿苷 BRDU

产品编号：NL1137

含量标准：>99%,高纯

包装规格：25mg 100mg 250mg 500mg 1g

产品形式：solid

基本信息

化学性质：

外观： 类白色粉末

熔点： 187~189°C

溶解性： 溶于水(10mg/ml)；溶于稀酸；DMSO 加热(50mg/ml)

水分： <1%

纯度： ≥99.0%

重金属： <10 ppm

紫外最大吸收波长：……280 nm

储存条件：-20℃，避光防潮密闭干燥

生物活性：Brdu，也称为溴化去氧尿苷，一种合成的胸苷类似物，在 S 期可替代胸腺嘧啶核苷选择性结合到细胞 DNA 中。从而检测细胞 DNA 合成和标记细胞分裂，凋亡等行为。在遗传研究中 Brdu 可通过活体注射或细胞培养加载，然后使用抗 Brdu 的单克隆抗体进行特异性标记，ICC 或 IHC 法染色法显示增殖细胞。另外，还能同时结合其它细胞标记物，双重染色，来判断增殖细胞的种类，增殖速度等，对研究细胞动力学有着重要意义。

产品应用：

胸腺嘧啶类似物，在遗传学研究中用作诱变剂，在细胞分裂的 S-期选择性地插进 DNA。

使用说明（仅供参考）

1. Brdu 储存液的准备

用 1X DPBS 充分溶解适量的Brdu 配置 10 mg/ml 的母液，过滤除菌后，按照 0.5ml/管的量分装放在-20°C或者-80°C 长期保存，避免反复冻融。Brdu 储存液再融化后，4°C 可稳定存放一周。

2. 体内 Brdu 标记

1） 腹腔注射法（常用）：无菌的 10 mg/ml（溶于 DPBS）适合用于体内注射用。按照 100-200 μl（1-2 mg） Brdu 的量腹腔注射到小鼠体内。注意：最短在注射后 0.5 h 后在小肠，胸腺和骨髓瘤处就能检测到Brdu。而一般在注射后 24 h 内几乎所有组织都能检测到Brdu。这个时间可能对于一些快速分化的组织如小肠来说有些久。

2） 根据自身的实验体系，在合适的时间点处死动物，摘除待研究的组织。使用冰冻切片或者石蜡包埋的方法进行组织处理和切片制备。然后进入后续的 IHC 染色步骤。

3. 体外 Brdu 标记（培养原代细胞或者细胞系）

注：总的来说，10 μM Brdu（稀释于培养液）是一个比较合适的方法用来标记不同物种来源的原代细胞或细胞系。当然，建议针对具体的实验体系优化方法。

1） 在 96 孔板上按标准步骤进行细胞培养，培养时间一般为 1-72 h。

2） Brdu 工作液的准备：用组织细胞培养液按照 1:30 的比例稀释储存液得到 1mM Brdu 工作液。然后取10 μl 1 mM Brdu 溶液直接加入 1 ml 组织培养液即得到最终工作液。37°C 温热。

3） 按 100 μl/孔 Brdu 工作液的量进行细胞标记，37°C 孵育 60 min~过夜。同时设置非Brdu 标记的细胞作为阴性对照。注意：最佳的孵育时间取决于细胞增殖速度以及需要达到的实验目的。比如，对于快速增殖细胞（如 HL-60）有效孵育时间为 30-45min；对于原代细胞（如未受外源刺激培养的外周血淋巴细胞） 孵育时间可能需要 24 h。细胞密度最好不要超过 2x106 cells/ml。

4） 制备单细胞层玻片，使用以下任何一种方法：

a. 细胞离心涂片（cytospin）制备：使用细胞离心涂片机，将 100μl 标记好的细胞（浓度为：1-2 x106 cells/ml）直接离心到干净，无脂肪，poly-L-lysin 包被的玻片上，风干。

b. 细胞涂片（cell-smear）制备：取一小滴标记好的细胞悬液于干净，无脂肪，poly-L-lysin 包被玻片的一端，然后用第二个干净玻片将其均匀涂布成一薄层。室温风干。

5） 将玻片置于 70%冰乙醇放在-20°C 下固定 20-30 min。

6） PBS 清洗细胞 3 次，每次 5min。

7） 加入 1.5M HCl 中室温孵育 30 min。注意：DNA 的变性对于 Brdu 染色的成功至关重要。

8） 吸去 HCl，PBS 清洗 2 次，每次 5min。

9） 进入后续 ICC 染色步骤。

4. 体外 Brdu 标记（组织薄片）

1） Brdu 工作液的准备：用组织细胞培养液按照 1:30 的比例稀释储存液得到 1mM Brdu 工作液。然后取10 -20 μl 1 mM Brdu 溶液直接加入 1 ml 组织培养液即得到最终工作液。确保有足够的工作液（37°C 温热）完全浸泡组织。

2） 用手术刀或者锋利的刀片将组织切割成约 1 mm 厚，2 mm2 大小的薄片。建议在温热的培养基内进行切片，利于维持组织的活力。

3） 转移组织薄片至预装有 10 ml Brdu 标记液的 15 ml 离心管内。于 37°，CO2 培养箱内孵育需要的时间。孵育时间可变，取决于组织薄片类型以及需要达到的实验目的（常用的为 2-4 h）。直接丢弃未用完的标记液。

4）37°C PBS 清洗组织薄片，每次 5 min。

5）使用标准的冰冻切片或者石蜡包埋切片的方法固定组织。