鼠尾胶原蛋白Ⅰ型 Rat Tail Tendon Collagen Type I

货号：SR3089

保存：4℃保存，切勿冻存，有效期为一年。

规格：10mg, 5mg/mL, 溶解于 0.006mol/L HAc, 无菌。

产品简介：

HARVEYBIO鼠尾胶原蛋白 I 型(rattailtendon collagen type I)是通过 Birkedal-Hansen 的方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。本公司鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿，培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞；也可用于制备三维胶，模拟真实的生长环境， 使细胞在三维环境中生长。

1.在使用HARVEYBIO鼠胶原蛋白 I 型包被的细胞培养皿中检查到 PC-12 细胞的贴壁和生长。

2.在 1mg/mL 浓度以上，pH 为 7 左右时可形成具有一定强度的三维胶，检查到 NIH-3T3 细胞在三维胶内正常生长、PC-12 细胞在三维胶表面正常生长。

使用方法：

1、细胞培养器皿的表面包被 推荐浓度：1-5µg/cm2

以包被浓度为2 µg/cm2 为例： 用无菌 0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/mL。

按以下表格体积加到相应的培养器皿中：

确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面，开盖在超净台上过夜晾干。 也可以在室温放置 1 小时后，用PBS 洗 3-4 次后直接使用。包被好的器皿在 4-25℃至少可保存 3 个月以上的时间。

2、三维胶原的制备

鼠尾胶原蛋白 I 型在浓度 1mg/mL 以上，pH 7 左右时可形成具有一定强度三维胶，建议成胶浓度 1-2mg/mL。胶原蛋白溶解于 0.006mol/L 乙酸中，在成胶过程中需要加入 0.06×体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。

需要的溶液（均需要无菌、预冷）：10×PBS（可含 10 mg/L 的酚红用于 pH 指示）或 10×培养液，0.1mol/L NaOH，0.1mol/L 乙酸(一般不用)，双蒸水不含细胞的三维胶原的制备（以配制 1mL，1mg/mL 三维胶为例）：将 200µL 鼠尾胶原蛋白 I 型(5mg/mL)加到置于冰浴的离心管中，加入 690µL H2O。然后加到 12µL 0.1mol/L NaOH 中（如果反过来把 12µL 0.1mol/L NaOH 加到胶原溶液中，会由于 NaOH 不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入 100µL 10×PBS 或 10×培养液，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后 pH 为 7 左右，如果 PBS 或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用 pH 试纸测试)。将培养器皿在室温(25 度左右)下放置 20 分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是 10×PBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。

含细胞的三维胶原的制备（以配制 1 mL，1mg/mL 三维胶为例）：准备好悬浮于培养液的细胞， 并放置于冰浴中。将 200µL 鼠尾胶原蛋白 I 型 (5mg/mL)加到 12µL 0.1mol/L NaOH 中（如果反过来把 12µL 0.1mol/L NaOH 加到胶原溶液中，会由于 NaOH 不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结）， 立即混匀。再加入 23µL 10×PBS 或 10×培养液，混匀(混匀后 pH 为 7 左右，如果 PBS 或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用 pH 试纸测试)。加入 760µL 的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置 20 分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。

注意事项：

鼠尾胶原蛋白 I 型在室温下 pH 中性时可迅速成胶，在操作过程中要尽量保持低温。