链霉亲和素
货号：SR1774
规格：1mg/10mg（有效含量，非实际体积）
保存：-20℃保存，有效期 1 年。
产品参数：
CAS：9013-20-1
英文名称：Streptavidin
纯度： ≥95% （SDS-PAGE） 活性：≥17U/mg
内 毒 素：≤5EU/mg
产品来源：大肠杆菌
分子量：约 64kD，为四聚体形式。
产品简介：
链霉亲和素（streptavidin，以下简称 SA）是与亲和素有相似生物学特性的一种蛋白质，在生理状态下为四聚体形式，一分子链霉亲和素能够与四分子生物素结合，但链霉亲和素不含糖基，非特异性结合远比亲和素低。基于链霉亲和素与生物素之间的高亲和力及多级放大效应，链霉亲和素－ 生物素系统目前广泛应用于生物反应检测领域。
本公司生产的链霉亲和素为经过基因重组，在大肠杆菌中表达，并采用亲和纯化所得的重组蛋白产品。ELISA 实验结果表明，重组链霉亲和素能够与 biotin 标记抗体较好结合，生物活性大于16U/mg（1U 的定义为每毫克 SA 能够结合的 biotin 的微克数）。
链霉亲和素已被广泛应用于多种生物技术领域，诸如：包被免疫检测用微孔板，制备 SA 偶联酶制 剂，SA 偶联荧光素、SA 偶联磁珠等，进而参与酶联免疫吸附和酶催化放大实验，免疫组化化学、 生物分子纯化、生物传感器、生物纳米微球、预靶向制药研究和生物芯片被料等。
使用方法：（仅供参考）
由于产品生产工艺中冻干环节会引入保护剂等，为减少您的实验误差，建议先通过内部检测方法，产品中蛋白进行准确定量后，再进行后续实验，并按实际情况进行产品用量调整。建议优先选择紫外吸收法进行定量，方法如下：
将样品从低温条件下拿出后，平衡至室温，并擦去瓶外附着的冷凝水，小心打开瓶盖，防止干粉飞溅损失。用去离子水或缓冲液进行复溶，充分溶解后，稀释至合适浓度，小心移入比色皿中， 以去离子水或缓冲液为空白对照，测定样品在 280 nm 处的吸光值（建议吸光值控制在 0.1-1.5区间内），将其代入以下公式计算蛋白质浓度：
式中：C：样品原液的蛋白质质量浓度（mg/mL）
A280nm：蛋白质溶液在 280nm 处测得的吸光值
N：稀释倍数
E(0.1%at 280nm)：1 mg/mL 蛋白质的消光系数
例如将本产品冻干粉充分溶解并混匀后，取适量原液稀释 10 倍，测得其在 280 nm 处的吸光值为 0.948，则原液的蛋白浓度为 10×0.948/3.16=3 mg/mL。
1. 微孔板包被
1) 用碳酸钠缓冲溶液（pH 9.6）溶解冻干粉，将浓度稀释成 3-10μg/mL（客户可设定梯度进行实验） 注意：SA 等电点是 6.0。
2) 用移液器吸取 100μL/孔，4℃过夜包被或者 37℃包被 3h；
3) 洗涤：倒尽板孔中液体，加 200μL 洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽，扣干。
4) 后续进入封闭、洗涤、抗原抗体结合流程。
5) 若不立即进入下游实验，包被板需要进行烘干保存时。包被前，将包被液中加入 20%蔗糖作为活性保护剂。
2. 偶联磁珠（以羧基磁珠为例）
A. 磁珠表面羧基活化
1. 混匀磁珠后，取 100 µL 羧基磁珠到 1 mL 离心管中，磁性分离去除上清液，用 200 µL MEST
溶液（100 mM MES，pH 5.0，0.05% Tween 20）进行磁性分离洗涤 2 次，然后移除上清液；
2. 迅速加入新鲜配制的 100 µL EDC 溶液（10 mg/mL，以上述 MEST 溶液作分散剂）和 100 µL NHS（10 mg/mL，以上述 MEST 溶液作分散剂）溶液到装有磁珠的离心管中，漩涡混匀使磁珠充分悬浮， 25℃活化 30 min，该期间保持磁珠的悬浮状态（可利用垂直混合仪进行颠倒混匀）；经过上述步骤之后，磁珠表面的羧基已经活化，可以与带有伯氨基的生物配体进行共价偶联。（活化状态不宜长时间保存，建议立即进行偶联）。
B. 磁珠与生物配体的共价偶联
1. 磁性分离去除上清液，加入 50 µg~200 µg 生物配体（合适用量及浓度需要根据具体实验进行优化，保持溶液 pH≈8.0，可加入 0.05% Tween 20 以提高磁珠分散性，避免缓冲体系中存在除生物配体以外含有伯氨基的试剂），轻柔地混匀；
2. 25℃偶联 2 h，或 25℃偶联 1 h 后放置 4℃静置过夜，偶联期间保持磁珠的悬浮状态（可利用垂直混合仪进行颠倒混匀）；
3. 离心管置于磁性分离架上磁性分离去除上清液，加入 200 µL PBST 溶液（pH 7.2，且含1%BSA）重悬磁珠（可根据需要进行超声），25℃反应 1 h 封闭磁珠表面未反应的活化羧基基团， 该期间保持磁珠的悬浮状态（可利用垂直混合仪进行颠倒混匀）；
4. 离心管置于磁性分离器上磁性分离去除上清液，每次用 200 µL PBS 溶液（pH 7.2）或保存溶液洗涤 3 次后，重新悬浮于保存溶液中（可根据需要来确定保存溶液的加入量，以调整偶联配体磁珠的浓度），保存于 4℃。如果固定的生物配体稳定，可以在保存溶液中加入 0.02%（w/v）叠氮化钠（NaN3）作为抑菌剂。
* 具体实验步骤可根据实验需求进行调整。
注意事项：
1. 链霉亲和素冻干粉易溶于水，溶解性可达 10 mg / mL 或更高；
2. 建议使用纯水溶解；
3. 如有未溶解物质，建议延长复溶时间。也可以通过离心或其他方式除去不溶物后，再用于后 续实验，不会对总蛋白产生很大的影响。
4. 考虑到蛋白质特殊性，冻干粉建议现用现配，溶解后应避免反复冻融，如需多次使用，建议 按需分装后冻存（-20℃)；避免在 4℃下长期存放。
5. 本产品为重组蛋白，实验操作时应严格按照实验室生物、化学安全规定进行；
6. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作
